IMEX- Instituto de Medicina Experimental – CONICET
Academia Nacional de Medicina
Curso “Introducción a la Citometría de Flujo- modalidad Online-”
Directora: Dra Norma E.Riera; SubDirectora: Dra Nora V.Galassi
Docentes Bqca Katia Canalejo, Dr Luis Pablo Schierloh, Técnica Marta Felippo,
Dra Nora V.Galassi, Dra Norma E.Riera
PROGRAMA
MODULO UNO
Primera Parte
Introducción.-Historia.-Esquema básico del Citómetro de Flujo.
Segunda Parte
Fuente de luz.-Geometría del haz de luz.-Sistema óptico.
Detector y amplificador de señales.
Tercera Parte
Sistema de fluidos.-Celda o cámara de flujo.-Sistema Informático
Cuestionario de Revisión
MODULO DOS
Gráficos: Gráfico de Puntos.-Gráfico Tri-dimensional.
Gráfico de Contornos.-Gráfico de Densidad.-Histograma.
Estadística:-Herramientas de análisis.-Operadores Lógicos.
Cuestionario de Revisión
MODULO TRES
Fluorocromos y Colorantes:Introducción.- Revisión-Citometría de fluorescencia: Fluorocromos: Aspectos generales.
Fluorocromos Orgánicos: Compuestos que se intercalan en el DNA. Aplicaciones y propiedades diferenciales.
Compuestos orgánicos pequeños que se conjugan a Biomoléculas.
Compuestos orgánicos que se modifican por actividad celular.
Compuestos orgánicos lipofílicos que se integran en las biomembranas.
Fluorocromos Biológicos: Ficobiliproteínas
Ejemplos:
Conjugación de fluorocromos proteicos
Fluorocromos en tandem FRET: f [Dlem, A lex ,r].
Proteína fluorescente verde (GFP) y sus derivados (FP’s)
Fluorocromos Nanotecnológicos
Quantum-Dots (Q-Dots)
Propiedades fluorescentes de los Q-Dots
Diseño de los Q-Dots aplicados en citometría de fluorescencia
Cuestionario de Revisión
MODULO CUATRO
Aplicaciones de la Citometría de Flujo
Primera Parte:
Estudio de Poblaciones leucocitarias
Estudio de otras Poblaciones sanguíneas
Cuestionario de Revisión
Segunda Parte:
Funcionalidad y Viabilidad Celular
Empleo de Microesferas
Contenido de ADN
Antígenos intracitoplasmáticos.
Células T reguladoras
Células Natural Killer (NK)
Apoptosis
Cuestionario de Revisión
MODULO CINCO
Diseño de Protocolo de Investigación
En este espacio se propondrán 4 o 5 temas. Cada grupo, que estará integrado entre 3 a 5 estudiantes, deberá realizar una búsqueda bibliográfica, discutir ydiseñarunprotocolo en el que se utilice laCitometríade Flujo como principal metodología
MODULO SEIS
Procesamiento de las muestras
Adquisición
Calibración y compensación
Cuestionario de Revisión
MODULO SIETE
Nuevos equipos y aplicaciones emergentes de la Citometría de Flujo
Tecnología aplicada en Citometría de Flujo
Citometría de Flujo Multiparamétrica
Innovaciones tecnológicas en Citometría de Flujo Multiparamétrica
Lasers, Detectores, Configuración del instrumental óptico
Nuevos Reactivos fluorescentes
Aplicaciones de la Citometría Multiparamétrica
Compensación electrónica en Citometría Multiparamétrica
Aplicaciones emergentes en Citometría de Flujo
Citómetros de Flujo para muestras Ambientales
Citómetros que permiten el análisis cuantitativo de imágenes
Cuestionario de Revisión
EVALUACION FINAL.-
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PRACTICA(opcional , cupo limitado-arancelado)
Dos días: JUEVES y VIERNES de 10 a 17 hs. Agosto- Fecha a confirmar
Lugar: IMEX-CONICET-ANM- Calle Pacheco de Melo 3081- CP 1425 C.A.B.A- Argentina.
Primer Día: Jueves
Marcación directa en “sangre entera”– Marcación y lisis- para determinar poblaciones linfocitarias células B, T, natural killer (NK), monocitos, polimorfonucleares-PMN-, marcación de hematíes, empleo de microesferas para la evaluación de células blancas.
Adquisición y análisis de resultados. Empleo de programas de adquisición manuales y automáticos. Ejercicios empleando las herramientas para el análisis.
Calibración del equipo automática y manual. Preparación del protocolo para la calibración.
Segundo Día: viernes
Purificación de subpoblaciones de células sanguíneas: Células Blancas totales- WBC, plaquetas, mononucleares periféricas –PBMC- y Neutrófilos PMN por métodos de centrifugación diferencial (plasma rico en plaquetas-PRP y BuffyCoats) gradiente discontinuo de FicollHipaque y sedimentación con dextrán.
Adquisición y análisis de subpoblaciones purificadas.
