Programa Curso online Introducción a la Citometría de Flujo

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IMEX- Instituto de Medicina Experimental – CONICET
Academia Nacional de Medicina

Curso “Introducción a la Citometría de Flujo- modalidad Online-”

Directora: Dra Norma E.Riera; SubDirectora: Dra Nora V.Galassi

Docentes Bqca Katia Canalejo, Dr Luis Pablo Schierloh, Técnica Marta Felippo,

Dra Nora V.Galassi, Dra Norma E.Riera

 

PROGRAMA

MODULO UNO

Primera Parte

Introducción.-Historia.-Esquema básico del Citómetro de Flujo.

 

Segunda Parte

Fuente de luz.-Geometría del haz de luz.-Sistema óptico.

Detector y amplificador de señales.

 

Tercera Parte

Sistema de fluidos.-Celda o cámara de flujo.-Sistema Informático

 

Cuestionario de Revisión

 

 

MODULO DOS

Gráficos: Gráfico de Puntos.-Gráfico Tri-dimensional.

Gráfico de Contornos.-Gráfico de Densidad.-Histograma.

Estadística:-Herramientas de análisis.-Operadores Lógicos.

 

Cuestionario de Revisión

 

MODULO TRES

Fluorocromos y Colorantes:Introducción.- Revisión-Citometría de fluorescencia: Fluorocromos: Aspectos generales.

Fluorocromos Orgánicos: Compuestos que se intercalan en el DNA. Aplicaciones y propiedades diferenciales.

Compuestos orgánicos pequeños que se conjugan a Biomoléculas.

Compuestos orgánicos que se modifican por actividad celular.

Compuestos orgánicos lipofílicos que se integran en las biomembranas.

Fluorocromos Biológicos: Ficobiliproteínas

Ejemplos:

Conjugación de fluorocromos proteicos

Fluorocromos en tandem FRET: f [Dlem, A lex ,r].

Proteína fluorescente verde (GFP) y sus derivados (FP’s)

Fluorocromos Nanotecnológicos

Quantum-Dots (Q-Dots)

Propiedades fluorescentes de los Q-Dots

Diseño de los Q-Dots aplicados en citometría de fluorescencia

Cuestionario de Revisión

 

MODULO CUATRO

Aplicaciones de la Citometría de Flujo

Primera Parte:

Estudio de Poblaciones leucocitarias

Estudio de otras Poblaciones sanguíneas

Cuestionario de Revisión

 

Segunda Parte:

Funcionalidad y Viabilidad Celular

Empleo de Microesferas

Contenido de ADN

Antígenos intracitoplasmáticos.

Células T reguladoras

Células Natural Killer (NK)

Apoptosis

Cuestionario de Revisión

 

MODULO CINCO

Diseño de Protocolo de Investigación

En este espacio se propondrán 4 o 5 temas. Cada grupo, que estará integrado entre 3 a 5  estudiantes, deberá realizar una búsqueda bibliográfica, discutir ydiseñarunprotocolo en el que  se utilice laCitometríade Flujo como principal metodología

 

MODULO SEIS

Procesamiento de las muestras

Adquisición

Calibración y compensación

Cuestionario de Revisión

 

MODULO SIETE

Nuevos equipos y aplicaciones emergentes de la Citometría de Flujo

Tecnología aplicada en Citometría de Flujo

Citometría de Flujo Multiparamétrica

Innovaciones tecnológicas en Citometría de Flujo Multiparamétrica

Lasers, Detectores, Configuración del instrumental óptico

Nuevos Reactivos fluorescentes

Aplicaciones de la Citometría Multiparamétrica

Compensación electrónica en Citometría Multiparamétrica

Aplicaciones emergentes en Citometría de Flujo

Citómetros de Flujo para muestras Ambientales

Citómetros que permiten el análisis cuantitativo de imágenes

Cuestionario de Revisión

 

EVALUACION FINAL.-

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PRACTICA(opcional , cupo limitado-arancelado)

Dos días: JUEVES y VIERNES de 10 a 17 hs. Agosto- Fecha a confirmar

Lugar: IMEX-CONICET-ANM- Calle Pacheco de Melo 3081- CP 1425 C.A.B.A- Argentina.

 

Primer Día: Jueves

Marcación directa en “sangre entera”– Marcación y lisis- para determinar poblaciones linfocitarias células B, T, natural killer (NK), monocitos, polimorfonucleares-PMN-, marcación de hematíes, empleo de microesferas para la evaluación de células blancas.

Adquisición y análisis de resultados. Empleo de programas de adquisición manuales y automáticos. Ejercicios empleando las herramientas para el análisis.

Calibración del equipo automática y manual. Preparación del protocolo para la calibración.

 

Segundo Día: viernes

Purificación de subpoblaciones de células sanguíneas: Células Blancas totales- WBC, plaquetas, mononucleares periféricas –PBMC- y Neutrófilos PMN por métodos de centrifugación diferencial  (plasma rico en plaquetas-PRP y BuffyCoats) gradiente discontinuo de FicollHipaque y sedimentación con dextrán.

Adquisición y análisis de subpoblaciones purificadas.

 

Para comunicarse con nosotros complete los siguientes casilleros y a la brevedad nos pondremos en comunicación con usted.